Quanidin tiosiyanat məhlulunun hazırlanmasında ümumi suallar və cavablar

Guanidin tiosiyanat güclü protein denaturantdır. O, nəinki zülalları sürətlə həll edir, hüceyrə strukturunun parçalanmasına gətirib çıxarır, ikincili strukturun məhv olması səbəbindən nüvə zülallarını nuklein turşularından tez ayıra bilir, həm də RNaselərə güclü denaturasiya təsirinə malikdir. Buna görə də, guanidin tiosiyanat hüceyrələri lizis etmək, RNT-ni zülaldan ayırmaq və RNT-ni məhlula buraxmaq üçün denaturant kimi istifadə edilə bilər. Bununla belə, guanidin tiosiyanat məhlulunun hazırlanması və istifadəsi zamanı bəzi problemlərə tez-tez rast gəlinir. Bu məqalə bu problemlərə bir-bir cavab verəcəkdir.

Quanidin tiosiyanat məhlulunu indi istifadə etmək və hazırlamaq lazımdırmı?

Guanidin tiosiyanatın son konsentrasiyası nümunə olaraq 4 m idi: 42 mm sodyum sitrat, 0,83% n-Lauril sarkozin (natrium dodesil, n-metilqlisin), 0,2 mm β-Merkaptoetanoldan CSB tamponunun hazırlanması; 25 q guanidin tiosiyanat və 33 ml CSB tampon məhlulu tamamilə həll olunana qədər qarışdırılır. Denaturasiya edilmiş məhlul 65 -də qızdırılaraq həll edilərək hazırlana bilər℃ və 4 -də saxlanılır℃ gözləmə rejimi üçün.

Buna görə də, guanidin tiosiyanat həllinin indi istifadə edilməsi və hazırlanması lazım deyil və hazırda bazarda müxtəlif konsentrasiyalarda həllər mövcuddur, lakin saxlama müddətinin çox uzun olması asan deyil, əks halda yağıntılar olacaq. istifadə etməzdən əvvəl diqqətlə yoxlanılır; Əlavə olaraq, birdəfəlik hazırlıq çox olarsa, yenidən qablaşdırmaq məsləhətdir.

Quanidin tiosiyanat məhlulu hazırlandıqdan sonra sterilizasiyaya ehtiyac varmı?

Çox dayanıqlı olmayan guanidin tiosiyanat məhlulunu sterilizasiya etmək lazım deyil və piroliz məhlulu ilə ümumiyyətlə 0,1% DEPC suyu istifadə olunur və su sterilizasiya edilmişdir. Bundan əlavə, RNT-nin çıxarılması üçün bütün reagentlər DEPC suyu ilə hazırlanmalı və reagent yeni açılmalı və yalnız RNT üçün istifadə edilməlidir.

Hazırlanmış lizatın sterilizasiya edilməsinə ehtiyac olmasa da, təcrübədə istifadə olunan plastik məhsulların RNazsız olduğu qeyd edilmişdir. İstifadəyə açılmamışsa, birbaşa istifadə edilə bilər. Digərləri müalicə edilməlidir: son konsentrasiyasını 0,1%etmək üçün DEPC -ni ikiqat distillə edilmiş suya əlavə edin, içərisində plastik məhsulları isladın, mətbəxi bir gecədə havalandırın və sonra alüminium folqa ilə möhürləyin, Yüksək temperatur və yüksək təzyiqli sterilizasiya ən azı 30 dəqiqə, quru və gözləmə rejimində.